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Evaluación de promotores polen-específicos de arabidopsis thaliana en plantas transgénicas de brassica napus.
Tesis

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  • Título
    Evaluación de promotores polen-específicos de arabidopsis thaliana en plantas transgénicas de brassica napus.
    Autor
    Aguilera Rodríguez, Natalia Fernanda
    Profesor Guía
    María Laura Federico
    Año
    2013
    Carrera
    Biotecnología
    Grado Académico
    Biotecnología
    Editorial
    Universidad de La Frontera, Temuco, Chile
    Resumen
    Los promotores constitutivos son ampliamente utilizados en ingeniería genética para la expresión de genes en todos los tejidos de la planta. Sin embargo, en algunos casos no se requiere la expresión constitutiva de proteínas foráneas en plantas transgénicas siendo beneficioso utilizar promotores que sólo expresan el transgén en tejidos u órganos vegetales específicos. Los promotores tejido-específicos tienen el potencial de otorgar expresión génica dirigida a sólo aquellas partes de la planta en las cuales se requiere la acumulación de una proteína transgénica (por ejemplo: hojas, raíces, semillas, etc.). A la fecha, un número de promotores tejido-específico han sido utilizados en la producción de plantas transgénicas estériles, resistentes a patógenos y a estrés abiótico. En Arabidopsis thaliana existen promotores que controlan la expresión de un grupo de cinco genes llamados POLLEN-SPECIFIC GENES (PSG 1-5). El promotor del gen PSG2 (proPSG2) es fuerte mientras que el promotor del gen PSG4 (proPSG4) es débil, pero ambos regulan la expresión exclusivamente en polen. Sin embargo, es necesario evaluar si estos promotores se comportan de la misma manera en especies de importancia agronómica como Brassica napus para luego utilizarlos en estrategias biotecnológicas. La relación evolutiva existente entre A. thaliana y B. napus permite suponer que la especificidad de tejido observada en Arabidopsis se conservará en Brassica. Para investigar el patrón de expresión de los promotores PSG2 y PSG4 en B. napus, un fragmento funcional en A. thaliana de cada promotor fue fusionado con los genes reporteros que codifican para la enzima ?-glucuronidasa (GUS) y la proteína verde fluorescente (GFP) en el vector pCAMBIA 2300. Las construcciones generadas se utilizaron para realizar transformación genética mediada por Agrobacterium tumefaciens. Una vez obtenidas las plantas transgénicas, se evaluó la expresión del gen GUS en distintos estadíos de desarrollo floral (polen y anteras), en hojas, tallo y raíz utilizando RT-PCR y análisis histoquímico (tinción_GUS). Luego de analizar un evento transgénico generado, se concluyeque la especificidad de expresión dirigida por proPSG2 es retenida en B. napus, ya que al igual que en A. thaliana se observó tinción positiva de los granos de polen y no de tejidos esporofíticos. Además se observó acumulación preferencial de transcritos del gen reportero en anteras utilizando RT-PCR.
    Idioma
    Español
    Derechos de Autor
    Esta obra está bajo una Licencia Creative Commons Atribución-NoComercial-SinDerivar 4.0 Internacional.
    Titular derechos de autor
    Universidad de La Frontera, Dirección de Bibliotecas y Recursos de Información
    Creative Commons
    https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
    Materia
    Arabidopsis thaliana
    Materia
    Promotores de tejidos
    Materia
    Ingeniería genética
    Materia
    Brassica napus
    Tipo de Documento
    Tesis
    Catalogador
    LTL
  • dc.title
    Evaluación de promotores polen-específicos de arabidopsis thaliana en plantas transgénicas de brassica napus.
    dc.creator
    Aguilera Rodríguez, Natalia Fernanda
    dc.contributor.advisor
    María Laura Federico
    dc.date
    2013
    dc.contributor.carrera
    Biotecnología
    dc.description.grado
    Biotecnología
    dc.publisher
    Universidad de La Frontera, Temuco, Chile
    dc.description.abstract
    Los promotores constitutivos son ampliamente utilizados en ingeniería genética para la expresión de genes en todos los tejidos de la planta. Sin embargo, en algunos casos no se requiere la expresión constitutiva de proteínas foráneas en plantas transgénicas siendo beneficioso utilizar promotores que sólo expresan el transgén en tejidos u órganos vegetales específicos. Los promotores tejido-específicos tienen el potencial de otorgar expresión génica dirigida a sólo aquellas partes de la planta en las cuales se requiere la acumulación de una proteína transgénica (por ejemplo: hojas, raíces, semillas, etc.). A la fecha, un número de promotores tejido-específico han sido utilizados en la producción de plantas transgénicas estériles, resistentes a patógenos y a estrés abiótico. En Arabidopsis thaliana existen promotores que controlan la expresión de un grupo de cinco genes llamados POLLEN-SPECIFIC GENES (PSG 1-5). El promotor del gen PSG2 (proPSG2) es fuerte mientras que el promotor del gen PSG4 (proPSG4) es débil, pero ambos regulan la expresión exclusivamente en polen. Sin embargo, es necesario evaluar si estos promotores se comportan de la misma manera en especies de importancia agronómica como Brassica napus para luego utilizarlos en estrategias biotecnológicas. La relación evolutiva existente entre A. thaliana y B. napus permite suponer que la especificidad de tejido observada en Arabidopsis se conservará en Brassica. Para investigar el patrón de expresión de los promotores PSG2 y PSG4 en B. napus, un fragmento funcional en A. thaliana de cada promotor fue fusionado con los genes reporteros que codifican para la enzima ?-glucuronidasa (GUS) y la proteína verde fluorescente (GFP) en el vector pCAMBIA 2300. Las construcciones generadas se utilizaron para realizar transformación genética mediada por Agrobacterium tumefaciens. Una vez obtenidas las plantas transgénicas, se evaluó la expresión del gen GUS en distintos estadíos de desarrollo floral (polen y anteras), en hojas, tallo y raíz utilizando RT-PCR y análisis histoquímico (tinción_GUS). Luego de analizar un evento transgénico generado, se concluyeque la especificidad de expresión dirigida por proPSG2 es retenida en B. napus, ya que al igual que en A. thaliana se observó tinción positiva de los granos de polen y no de tejidos esporofíticos. Además se observó acumulación preferencial de transcritos del gen reportero en anteras utilizando RT-PCR.
    dc.language
    Español
    dc.rights
    Esta obra está bajo una Licencia Creative Commons Atribución-NoComercial-SinDerivar 4.0 Internacional.
    dc.rights.holder
    Universidad de La Frontera, Dirección de Bibliotecas y Recursos de Información
    dc.rights.uri
    https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
    dc.subject
    Arabidopsis thaliana
    dc.subject
    Promotores de tejidos
    dc.subject
    Ingeniería genética
    dc.subject
    Brassica napus
    dc.type
    Tesis
    dc.ufro.catalogador
    LTL

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