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Efecto de hidroxiestradioles y metoxiestradioles sobre la viabilidad de células de leydig aisladas
Tesis

1099
537

  • Título
    Efecto de hidroxiestradioles y metoxiestradioles sobre la viabilidad de células de leydig aisladas
    Autor
    Valencia Robles, Cecilia Herminda
    Profesor Guía
    Parada Bustamante, Alexis
    Año
    2014
    Carrera
    Biotecnología
    Grado Académico
    Biotecnólogo
    Editorial
    Universidad de La Frontera, Temuco, Chile
    Resumen
    La infertilidad afecta a un 15% de las parejas a nivel mundial y en un 30% de los casos el origen de esta incapacidad reproductiva está asociada a una disfunción masculina. Una falla primaria de la espermatogénesis, la cual está definida como una falla testicular intrínseca en el proceso espermatogénico, es uno de los diagnósticos de infertilidad masculina más comunes en Chile; sin embargo, en alrededor de un 50 % de los casos la etiología de esta condición es aún desconocida. Las células de Leydig son las encargadas de la producción hormonal en el testículo, por lo que una disminución en la viabilidad de este tipo celular y/o alteraciones en la producción de las hormonas producidas por ellas, gatillados por distintos factores internos y/o externos, podrían ser factores etiológicos de una falla espermatogénica primaria. Estradiol (E2) es normalmente producido en el testículo de mamíferos por las células de Leydig a través de la aromatización de testosterona. Su metabolización a compuestos menos activos ocurre principalmente en el hígado. En tejidos periféricos, E2 también puede ser metabolizado a 2-Hidroxiestradiol (2OHE2) o a 4-Hidroxiestradiol (4OHE2) y luego a 2-Metoxiestradiol (2ME2) o a 4-Metoxiestradiol (4ME2). Estudios previos han determinado que las enzimas que producen estos metabolitos de estradiol se expresan en el testículo humano y que altas concentraciones de algunos de estos metabolitos afectan negativamente la viabilidad de espermatozoides y de las células de Sertoli, sugiriendo que un aumento anormal en las concentraciones intratesticulares de algunos de estos metabolitos podría estar relacionado con la etiología de la infertilidad masculina; sin embargo, ningún estudio ha determinado el efecto de estos metabolitos sobre la viabilidad de las células de Leydig. El objetivo de este trabajo de tesis fue evaluar si las células de Leydig de ratón adulto y la línea celular TM3 (obtenida a partir de células de Leydig de ratón) tendrían la capacidad de producir hidroxiestradioles y metoxiestradioles para luego evaluar el efecto de distintas concentraciones de 2OHE2, 4OHE2, 2ME2 y 4ME2 sobre la viabilidad de las células de Leydig in vitro y los posibles mecanismos por los cuales estos metabolitos afectarían a las células de Leydig. Para esto último, utilizamos como modelo experimental la línea celular TM3. Determinamos que las células de Leydig de ratón adulto, al igual que las células TM3 expresan las enzimas CYP1A1, CYP1B1 y COMT en un patrón similar al observado en testículo humano. Por otra parte a través de la evaluación de la reducción in vivo del compuesto 3-(4,5-dimetil-2-il)-5-(3-carboximetoxifenil)-2-(4-sulfofenil)-2H-tetrazolium (Ensayo de MTS), determinamos que altas concentraciones de 2OHE2 (10 y 20?M), 2ME2 y 4ME2 (20?M) disminuyeron significativamente la viabilidad de las células TM3 a las 24 horas de tratamiento, lo cual fue confirmado a través del ensayo de TUNEL. 2OHE2 10 ?M, pero no 2OHE2 20 ?M, indujo la escisión de caspasa 3 y PARP-1, sugiriendo que sólo 2OHE2 10 ?M induce la activación de procesos apoptóticos dependientes de caspasas. Por otro lado, 2ME2 20 ?M indujo la escisión de caspasa 3, pero no de PARP-1, sugiriendo que este metabolito activa procesos apoptóticos dependientes de caspasas que no desembocan en la escisión de PARP-1. Finalmente, 4ME2 no indujo la escisión de caspasa 3 ni de PARP-1, sugiriendo que este metabolito disminuye la viabilidad de las células de Leydig a través de mecanismos que no involucran procesos apoptóticos dependientes de caspasas. Determinamos además que los mecanismos celulares por los cuales estos metabolitos de E2 afectan negativamente la viabilidad de las células de Leydig serían independientes del receptor de estrógenos y no involucrarían un aumento del estrés oxidativo, ya que el efecto de 2OHE2, 2ME2 y 4ME2 no fueron bloqueados por el antagonista del receptor de estrógenos ICI 182780, ni por el antioxidante N-Acetilcisteína.
    Idioma
    Español
    Descripción
    Derechos de Autor
    Esta obra está bajo una Licencia Creative Commons Atribución-NoComercial-SinDerivar 4.0 Internacional.
    Titular derechos de autor
    Universidad de La Frontera, Dirección de Bibliotecas y Recursos de Información
    Creative Commons
    https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
    Materia
    Hidroxiestradioles
    Materia
    Metoxiestradioles
    Materia
    Infertilidad humana
    Tipo de Documento
    Tesis
    Catalogador
    LTL
  • dc.title
    Efecto de hidroxiestradioles y metoxiestradioles sobre la viabilidad de células de leydig aisladas
    dc.creator
    Valencia Robles, Cecilia Herminda
    dc.contributor.advisor
    Parada Bustamante, Alexis
    dc.date
    2014
    dc.contributor.carrera
    Biotecnología
    dc.description.grado
    Biotecnólogo
    dc.publisher
    Universidad de La Frontera, Temuco, Chile
    dc.description.abstract
    La infertilidad afecta a un 15% de las parejas a nivel mundial y en un 30% de los casos el origen de esta incapacidad reproductiva está asociada a una disfunción masculina. Una falla primaria de la espermatogénesis, la cual está definida como una falla testicular intrínseca en el proceso espermatogénico, es uno de los diagnósticos de infertilidad masculina más comunes en Chile; sin embargo, en alrededor de un 50 % de los casos la etiología de esta condición es aún desconocida. Las células de Leydig son las encargadas de la producción hormonal en el testículo, por lo que una disminución en la viabilidad de este tipo celular y/o alteraciones en la producción de las hormonas producidas por ellas, gatillados por distintos factores internos y/o externos, podrían ser factores etiológicos de una falla espermatogénica primaria. Estradiol (E2) es normalmente producido en el testículo de mamíferos por las células de Leydig a través de la aromatización de testosterona. Su metabolización a compuestos menos activos ocurre principalmente en el hígado. En tejidos periféricos, E2 también puede ser metabolizado a 2-Hidroxiestradiol (2OHE2) o a 4-Hidroxiestradiol (4OHE2) y luego a 2-Metoxiestradiol (2ME2) o a 4-Metoxiestradiol (4ME2). Estudios previos han determinado que las enzimas que producen estos metabolitos de estradiol se expresan en el testículo humano y que altas concentraciones de algunos de estos metabolitos afectan negativamente la viabilidad de espermatozoides y de las células de Sertoli, sugiriendo que un aumento anormal en las concentraciones intratesticulares de algunos de estos metabolitos podría estar relacionado con la etiología de la infertilidad masculina; sin embargo, ningún estudio ha determinado el efecto de estos metabolitos sobre la viabilidad de las células de Leydig. El objetivo de este trabajo de tesis fue evaluar si las células de Leydig de ratón adulto y la línea celular TM3 (obtenida a partir de células de Leydig de ratón) tendrían la capacidad de producir hidroxiestradioles y metoxiestradioles para luego evaluar el efecto de distintas concentraciones de 2OHE2, 4OHE2, 2ME2 y 4ME2 sobre la viabilidad de las células de Leydig in vitro y los posibles mecanismos por los cuales estos metabolitos afectarían a las células de Leydig. Para esto último, utilizamos como modelo experimental la línea celular TM3. Determinamos que las células de Leydig de ratón adulto, al igual que las células TM3 expresan las enzimas CYP1A1, CYP1B1 y COMT en un patrón similar al observado en testículo humano. Por otra parte a través de la evaluación de la reducción in vivo del compuesto 3-(4,5-dimetil-2-il)-5-(3-carboximetoxifenil)-2-(4-sulfofenil)-2H-tetrazolium (Ensayo de MTS), determinamos que altas concentraciones de 2OHE2 (10 y 20?M), 2ME2 y 4ME2 (20?M) disminuyeron significativamente la viabilidad de las células TM3 a las 24 horas de tratamiento, lo cual fue confirmado a través del ensayo de TUNEL. 2OHE2 10 ?M, pero no 2OHE2 20 ?M, indujo la escisión de caspasa 3 y PARP-1, sugiriendo que sólo 2OHE2 10 ?M induce la activación de procesos apoptóticos dependientes de caspasas. Por otro lado, 2ME2 20 ?M indujo la escisión de caspasa 3, pero no de PARP-1, sugiriendo que este metabolito activa procesos apoptóticos dependientes de caspasas que no desembocan en la escisión de PARP-1. Finalmente, 4ME2 no indujo la escisión de caspasa 3 ni de PARP-1, sugiriendo que este metabolito disminuye la viabilidad de las células de Leydig a través de mecanismos que no involucran procesos apoptóticos dependientes de caspasas. Determinamos además que los mecanismos celulares por los cuales estos metabolitos de E2 afectan negativamente la viabilidad de las células de Leydig serían independientes del receptor de estrógenos y no involucrarían un aumento del estrés oxidativo, ya que el efecto de 2OHE2, 2ME2 y 4ME2 no fueron bloqueados por el antagonista del receptor de estrógenos ICI 182780, ni por el antioxidante N-Acetilcisteína.
    dc.language
    Español
    dc.physicaldescription
    dc.rights
    Esta obra está bajo una Licencia Creative Commons Atribución-NoComercial-SinDerivar 4.0 Internacional.
    dc.rights.holder
    Universidad de La Frontera, Dirección de Bibliotecas y Recursos de Información
    dc.rights.uri
    https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
    dc.subject
    Hidroxiestradioles
    dc.subject
    Metoxiestradioles
    dc.subject
    Infertilidad humana
    dc.type
    Tesis
    dc.ufro.catalogador
    LTL

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