Universidad de La Frontera

Biblioteca Digital

Búsqueda Avanzada
# Tipo Tamaño
1 PDF 2.63 MB
#135
Identificación de genes de referencia para normalización de datos de pcr en tiempo real en embriones bovinos producidos in vitro
Tesis

1079
840

  • Título
    Identificación de genes de referencia para normalización de datos de pcr en tiempo real en embriones bovinos producidos in vitro
    Autor
    Luchsinger Faret, Charlotte Marie Elvira
    Profesor Guía
    Felmer Dörner, Ricardo
    Año
    2012
    Carrera
    Biotecnología
    Grado Académico
    Biotecnólogo
    Editorial
    Universidad de La Frontera, Temuco, Chile
    Resumen
    La PCR en tiempo real es una técnica sensible y eficiente para la estimación cuantitativa de los niveles de transcripción de los genes específicos de interés expresados en muestras que contienen pequeñas cantidades de ARNm, como es el caso de ovocitos y embriones en etapas tempranas del desarrollo embrionario. No obstante, el nivel de expresión de estos genes puede variar entre tejidos y/o células no sólo como resultado de la expresión diferencial, sino también, debido a diferentes factores, tal como la elección de genes de referencia para normalizar la expresión de los genes de interés, por lo que la selección de estos genes es fundamental para un estudio preciso de la expresión génica. En esta tesis, se evaluó mediante la técnica de PCR en tiempo real, la estabilidad diferentes genes de referencia ACTB, eEF1A2, GAPDH, H2A, HMBS, HPRT1, PPIA, SDHA, SF3A1 e YWHAZ, en distintas etapas; las que incluyeron a ovocito inmaduro, ovocito maduro y embriones de 16- 32 células, así como también en blastocistos generados por fecundación in vitro, inyección intracitoplasmática de espermatozoides, transferencia nuclear de células somáticas y partenogénesis, para su validación como genes normalizadores para estudios de expresión génica en embriones bovinos. Los datos fueron analizados mediante geNorm y NormFinder en donde se observaron diferencias entre los niveles de transcripción de los genes candidatos en las diferentes etapas del ovocito y embrionarias, y en los embriones generados por los distintos métodos de producción in vitro evaluados. De acuerdo a los resultados de estos análisis, se estableció que en blastocistos producidos in vitro los genes más estables son HMBS, GAPDH y SF3A1, por lo que se recomienda su uso como genes de referencia en análisis de expresión génica en embriones bovinos. Así mismo, se sugiere el uso de la media geométrica de los tres genes más estables como un factor de normalización más preciso para minimizar las variaciones experimentales. Palabras claves: PCR en tiempo real, normalización, genes de referencia, expresión génica desarrollo embrionario temprano, geNorm, NormFinder.
    Idioma
    Español
    Derechos de Autor
    Esta obra está bajo una Licencia Creative Commons Atribución-NoComercial-SinDerivar 4.0 Internacional.
    Titular derechos de autor
    Universidad de La Frontera, Dirección de Bibliotecas y Recursos de Información
    Creative Commons
    https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
    Materia
    Embriología experimental
    Materia
    Fecundación in vitro
    Materia
    Embriones de ganado vacuno
    Materia
    Transferencia de embriones
    Tipo de Documento
    Tesis
    Catalogador
    LTL
  • dc.title
    Identificación de genes de referencia para normalización de datos de pcr en tiempo real en embriones bovinos producidos in vitro
    dc.creator
    Luchsinger Faret, Charlotte Marie Elvira
    dc.contributor.advisor
    Felmer Dörner, Ricardo
    dc.date
    2012
    dc.contributor.carrera
    Biotecnología
    dc.description.grado
    Biotecnólogo
    dc.publisher
    Universidad de La Frontera, Temuco, Chile
    dc.description.abstract
    La PCR en tiempo real es una técnica sensible y eficiente para la estimación cuantitativa de los niveles de transcripción de los genes específicos de interés expresados en muestras que contienen pequeñas cantidades de ARNm, como es el caso de ovocitos y embriones en etapas tempranas del desarrollo embrionario. No obstante, el nivel de expresión de estos genes puede variar entre tejidos y/o células no sólo como resultado de la expresión diferencial, sino también, debido a diferentes factores, tal como la elección de genes de referencia para normalizar la expresión de los genes de interés, por lo que la selección de estos genes es fundamental para un estudio preciso de la expresión génica. En esta tesis, se evaluó mediante la técnica de PCR en tiempo real, la estabilidad diferentes genes de referencia ACTB, eEF1A2, GAPDH, H2A, HMBS, HPRT1, PPIA, SDHA, SF3A1 e YWHAZ, en distintas etapas; las que incluyeron a ovocito inmaduro, ovocito maduro y embriones de 16- 32 células, así como también en blastocistos generados por fecundación in vitro, inyección intracitoplasmática de espermatozoides, transferencia nuclear de células somáticas y partenogénesis, para su validación como genes normalizadores para estudios de expresión génica en embriones bovinos. Los datos fueron analizados mediante geNorm y NormFinder en donde se observaron diferencias entre los niveles de transcripción de los genes candidatos en las diferentes etapas del ovocito y embrionarias, y en los embriones generados por los distintos métodos de producción in vitro evaluados. De acuerdo a los resultados de estos análisis, se estableció que en blastocistos producidos in vitro los genes más estables son HMBS, GAPDH y SF3A1, por lo que se recomienda su uso como genes de referencia en análisis de expresión génica en embriones bovinos. Así mismo, se sugiere el uso de la media geométrica de los tres genes más estables como un factor de normalización más preciso para minimizar las variaciones experimentales. Palabras claves: PCR en tiempo real, normalización, genes de referencia, expresión génica desarrollo embrionario temprano, geNorm, NormFinder.
    dc.language
    Español
    dc.rights
    Esta obra está bajo una Licencia Creative Commons Atribución-NoComercial-SinDerivar 4.0 Internacional.
    dc.rights.holder
    Universidad de La Frontera, Dirección de Bibliotecas y Recursos de Información
    dc.rights.uri
    https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
    dc.subject
    Embriología experimental
    dc.subject
    Fecundación in vitro
    dc.subject
    Embriones de ganado vacuno
    dc.subject
    Transferencia de embriones
    dc.type
    Tesis
    dc.ufro.catalogador
    LTL

Dirección de Bibliotecas y Recursos de Información
Universidad de La Frontera
biblioteca.digital@ufrontera.cl
+56-45-2325186
Avenida Francisco Salazar #01145, Temuco

Las obras contenidas en esta plataforma están bajo una Licencia Creative Commons Atribución-NoComercial-SinDerivar 4.0 Internacional
Licencia Creative Commons